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端粒酶活性分析
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  • 端粒酶活性分析

    端粒酶活性分析简介

    粒是真核细胞染色体末端的一段特殊序列,由上千个6碱基重复序列(TTAGGG)组成。在体细胞中,随着细胞的分裂,端粒长度会变短。端粒酶是基本的核蛋白逆转录酶,在细胞染色体复制过程中,能够以自身RNA为模板,在染色体3’末端合成重复序列,维持端粒的长度。端粒酶的活性端粒酶在正常人体组织中的活性被抑制,但是在一些“不死细胞”如肿瘤细胞、生殖细胞中则具有很高的活性,补偿DNA复制导致的端粒缩短从而维持端粒长度的稳定。因此可以假设端粒长度可能起到“有丝分裂钟”的作用,来可作为测量细胞分裂的次数的标志,最终作为细胞衰老和凋亡的信号。因此,检测细胞中端粒酶的活性对干细胞、肿瘤生物学的研究具有很重要的意义,已有研究表明,在20多种肿瘤细胞中,80%以上可以检测到高端粒酶活性。

    利用端粒酶在体外可以以其自身RNA的模板区为模板,在适宜的寡核苷酸链的末端添加6个碱基的重复序列的原理,1994年Kim建立了基于PCR基础上的端粒重复序列扩增法(telomeric repeat amplification protocol, TRAP)。TRAP主要原理如下:首先合成一个18nt的TS做上游引物,端粒酶结合TS末端的GTT并合成AGGGTTAG,然后每经过一次转位合成一个ggttag的6碱基重复序列,端粒酶灭活后,加入一个24nt的CX做下游引物,经过多次变性-退火-延伸,扩增端粒酶延伸产物。然后对PCR产物使用不同的方法进行检测,从而达到检测端粒酶活性的目的,目前主要的方法有同位素法、染色法、荧光法、ELISA法。目前大部分的端粒酶检测试剂盒均是按照这个原理发展起来的。


    检测结果示例

    通过TRAP-PCR染色法检测鉴定样品中端粒酶活性



    检测原理

    端粒DNA与细胞的寿命密切相关,而合成又依赖于端粒酶。正常人体细胞中不能检测出端粒酶活性的表达,而肿瘤细胞株及大多数肿瘤组织中的端粒酶活性却异常的高表达。TRAP-银染法端粒酶活性检测试剂盒是采用端粒重复序列扩增的方法,利用银染技术检测端粒酶的活性。阳性结果在凝胶电泳上显示相隔6 bp的梯状条带,条带的深浅表示端粒酶活性的大小。

    实验室检测流程
    1.细胞端粒酶或组织标本端粒酶的提取。
    2.PCR扩增。
    3.聚丙烯酰胺凝胶电泳。
    4.银染。


    客户提供
    1、样品信息:包括来源、种属等。
    2、实验样本材料:新鲜细胞样本不少于5×105 个,新鲜血浆样本不少于500ul。

    服务周期

    2-3周(具体视样品数而定)


    项目交付

    1、提交实验报告书,包括实验材料、试剂、仪器、实验过程方法、结果及分析。

    2、原始数据、图片,以及文本电子版。


    服务流程

    1、提交项目课题相关需求和资料。

    2、与我们的专业技术团队讨论项目细节。

    3、根据讨论后的意见对实验方案进行修改。

    4、双方均满意并达成一致,签订技术服务合同。

    5、开展实验,按期完成合同规定的内容。

    6、结题,提供实验原始结果和分析结果、实验流程、实验条件等等。


    我们的优势

    1、提供各种实验材料和仪器,满足项目课题实验需要。

    2、专业的操作人员。

    3、高规格实验室。

    4、数据结果交付周期快。

    5、完善的服务体系,全程跟进,确保满意。


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