详细信息：

抗体类药物的临床应用为肿瘤免疫治疗研究提供了动力，双特异性抗体可以通过两个不同抗原结合位点，既可以通过抑制肿瘤转导通路，又可以巢集更多的免疫细胞产生对肿瘤的杀伤作用。免疫学和分子生物学技术的发展和日趋完善为制备针对HER2和CD40双特异性单链抗体治疗HER2过表达肿瘤研究提供了理论和技术保证。本研究在以往的研究基础上，体外分别合成HER2和CD40的特异性ScFv片段，连接片段成双特异性ScFv抗体，并通过体内及体外实验验证其激活肿瘤特异性免疫进而杀伤肿瘤的作用。为开发具有临床应用前景的双特异性抗体肿瘤靶向治疗奠定实验基础。首先通过噬菌体展示成功筛选获取了高亲和力的抗CD40单链抗体克隆，通过噬菌体ELISA及梯度噬菌体ELISA证实了其亲和力及特异性，并通过基因测序及序列比对证实了其来源及结构正确性。通过重叠PCR成功拼接获取双特异性单链抗体序列全长，并通过原核蛋白表达成功获得功能性抗CD40-HER2双抗蛋白。本研究首先使用4T1BALB/c小鼠模型成功验证了双特异性单链抗体可通过与DC表面CD40结合，促进其成熟，并进一步增强抗原提呈，激活肿瘤特异性T淋巴细胞，最终在体外及体内发挥抑制肿瘤增殖的作用。在以上基础上，本研究继续构建T6-17BALB/c-nude小鼠肿瘤模型，通过体内外实验证实抗CD40-HER2双抗体可通过与HER2结合，阻断其下游酪氨酸激酶信号通路，进而抑制肿瘤细胞增殖。综上，本研究基本依照最初课题设计，全面完成了抗CD40-HER2双抗的设计、构建及表达，并对其功能进行了体内外实验验证。