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本发明提供了一种信号增强型近红外荧光探针，化学结构式如式(Ⅰ)所示：(Ⅰ)，式(Ⅰ)中，X1为‑S‑或‑Se‑，R'为C1‑12的亚烷基，X2为‑C(CH3)2‑、‑O‑、‑S‑或‑Se‑，R1和R2分别独立地选自H原子、C1‑18烷基或如SO3R5所示的基团，其中，R5为C1‑18烷基或苄基，R3和R4分别独立地选自C1‑18烷基或苄基，Y为氟、氯、溴或碘。该探针的激发、发射光均在近红外光区，stocks位移较大、背景干扰少，对硫醇有较高的灵敏度、高选择性，同时探针的毒性低，对细胞和活体伤害较小，很适合用来进行生物体内硫醇的检测。本发明还提供了该探针的制备方法及应用。