本发明属于新化合物制备方法及其抗肿瘤活性测定领域，尤其是一种3, 5-二异戊烯基，2, 4, 4’三羟基查尔酮及其衍生物的用途和制备，结构式中R1为氢或异戊烯基，R2为氢或异戊烯基，R3为氢或甲基，R4为氢或甲基，R5为氢或甲基，其中R1-R5不同时为氢。其抗肿瘤活性测定所用的三种肿瘤细胞分别为人白血病细胞(K562)、人结肠癌细胞(HT-29)、人肝癌细胞(HepG2)。本发明合成出此类双取代查尔酮类衍生物，部分为首次合成，并进行了体外细胞抗肿瘤活性的测定，结果显示此类部分衍生物对三种肿瘤细胞有一定的抑制活性(IC50< 10μM)，具有潜在的抗肿瘤生物活性，该类衍生物合成路线短，合成工艺和纯化方法简单，收率较高。