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丝状真菌黑曲霉广泛应用于生物技术行业的化学品和酶的生产。目前，由于缺乏有效的遗传工具，这种有价值的生物的改良工程受到了阻碍。本团队开发了一种基于 Cre-loxP 的黑曲霉基因编辑系统，并探讨了该系统在黑曲霉细胞工厂构建中生产各种有机酸的应用。v 本团队检测了两个已建立的诱导系统，木聚糖酶 A 基因启动子 Pxln 和 Tet-on 系统，以驱动 cre 的表达，从而选择标记物 hyh 的缺失。在诱导条件下，Pxln 驱动的 cre 驱动菌株 loxP 位点特异性重组效率约为 2%，而 Tet-on驱动的 cre 位点特异性重组效率约为 34%，该菌株作为进一步遗传工程的平台菌株。利用构建的遗传操作系统，本团队构建了含有不同拷贝的草酰乙酸乙酰水合酶基因（oahA）的菌株，所得菌株草酸产量增加了 3.1 倍。此外，通过四步遗传操作（oahA 缺失、pyc、mdh3 和 C4-二羧酸转运蛋白基因 c4t318 插入），获得了高效的苹果酸生产菌株。获得的菌株摇瓶培养产量为 120.38 g/L，补料分批发酵产量为 201.24 g/L。所构建的改良的 Cre-loxP 系统为黑曲霉无痕基因操作提供了新的工具，对有机酸生产行业中所有菌株的改造提供了新方法；突变菌株苹果酸产量达到了 201.24 g/L，有非常强的工业应用潜力，且可以作为耐酸菌株用于各种有机酸生产，若实现工业化生产，会具有非常大的社会效益。
丝状真菌黑曲霉广泛应用于生物技术行业的化学品和酶的生产。目前，由于缺乏有效的遗传工具，这种有价值的生物的改良工程受到了阻碍。本团队开发了一种基于 Cre-loxP 的黑曲霉基因编辑系统，并探讨了该系统在黑曲霉细胞工厂构建中生产各种有机酸的应用。v 本团队检测了两个已建立的诱导系统，木聚糖酶 A 基因启动子 Pxln 和 Tet-on 系统，以驱动 cre 的表达，从而选择标记物 hyh 的缺失。在诱导条件下，Pxln 驱动的 cre 驱动菌株 loxP 位点特异性重组效率约为 2%，而 Tet-on驱动的 cre 位点特异性重组效率约为 34%，该菌株作为进一步遗传工程的平台菌株。利用构建的遗传操作系统，本团队构建了含有不同拷贝的草酰乙酸乙酰水合酶基因（oahA）的菌株，所得菌株草酸产量增加了 3.1 倍。此外，通过四步遗传操作（oahA 缺失、pyc、mdh3 和 C4-二羧酸转运蛋白基因 c4t318 插入），获得了高效的苹果酸生产菌株。获得的菌株摇瓶培养产量为 120.38 g/L，补料分批发酵产量为 201.24 g/L。所构建的改良的 Cre-loxP 系统为黑曲霉无痕基因操作提供了新的工具，对有机酸生产行业中所有菌株的改造提供了新方法；突变菌株苹果酸产量达到了 201.24 g/L，有非常强的工业应用潜力，且可以作为耐酸菌株用于各种有机酸生产，若实现工业化生产，会具有非常大的社会效益。
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张女士
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